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红掌切花组培叶片愈伤组织诱导技术

红掌切花组培叶片愈伤组织诱导技术:

1.外植体的选择:在田间选择符合品种特征,无虫害,长势健壮的植株,选择开始展开但未平展的新叶,从叶柄部取下。

2.外植体的处理:在实验室中切去叶柄,放盆中加洗涤灵清洗表面尘土,清水冲洗干净后,将叶片切成约1cm的方片,注意避开叶脉,重新加入洗涤灵浸泡30分钟,流水冲洗2小时。

3.外植体表面灭菌:在超净工作台中将叶片进行表面灭菌,一般采用组合灭菌方法,先以75%酒精浸泡30秒,再转入灭菌液中灭菌,灭菌液可选择次氯酸钠、新洁尔灭、升汞等,根据灭菌液种类、浓度实验选择灭菌时间,灭菌后以无菌水冲洗干净。

4.接种:将经表面灭菌清洗干净的叶片块用无菌滤纸吸去水分,去掉边缘部分留中间长0.5cm的叶片块接种在培养皿中,一个培养皿可接多块,培养基成分为1/2MS附加6-BA2mg/L,2.4-D0.5mg/L,接种后立即封闭培养皿。

5.培养:将接有叶片块的培养皿放置在25±1℃的培养箱中暗培养,约30天后叶片块边缘形成米粒状淡黄色愈伤组织。